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质粒

质粒是细菌染色体外遗传因子,DNA呈环状,大小为1~200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在,很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态,一是“紧密型”,复制受寄主的控制,每个细胞中只有一个或几个拷贝;二是“松弛型”,质粒自我复制,每个细胞可有10~200个拷贝。当细胞本身DNA停止复制,蛋白质停止合成后,质粒的拷贝数仍可继续扩增至数千个。

质粒是细菌染色体外遗传因子,DNA呈环状,大小为1~200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在,很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态,一是“紧密型”,复制受寄主的控制,每个细胞中只有一个或几个拷贝;二是“松弛型”,质粒自我复制,每个细胞可有10~200个拷贝。当细胞本身DNA停止复制,蛋白质停止合成后,质粒的拷贝数仍可继续扩增至数千个。用作载体的质粒都是“松弛型”的。此外还应具有分子量小、易转化、有一至多个选择标记的特点。pBR322质粒是广泛应用的载体分子,它有两个标记基因(图2)。当外源DNA片段插入标记基因时,后者失活,很易与不带外源DNA片段的克隆分开。质粒型载体一般只能携带10kb以下的DNA片段,适用于构建原核生物基因文库,cDNA库和次级克隆。