使病毒在细胞单层上形成局限性病灶的方法。又称空斑技术。

将稀释的病毒悬液接种于良好的细胞单层上，使细胞与病毒吸附一定时间后，再于单层细胞上覆盖以营养琼脂培养基，进行培养。在细胞中感染并增殖的病毒粒子由于琼脂层覆盖的限制，只能感染和破坏邻近的细胞，逐渐形成一个局限性的变性死亡细胞区（即蚀斑）。当用中性红染色时，由于染料着染活细胞而不着染死细胞，即“蚀斑”不能摄入活性染料，所以出现清晰而不染色的蚀斑，衬托于染色的红色活细胞背景中。但新城疫病毒的某些变异株和SV₄₀病毒感染的细胞，对中性红的亲和力反而高于未感染细胞，因此可形成红色蚀斑。中性红染料或先掺于覆盖的营养琼脂中，或于培养后期再加入染色。

①测定病毒感染力。蚀斑是由一个感染性病毒粒子产生的，蚀斑形成单位（PFU）是测定感染病毒浓度的最精确方法；②用于纯化病毒。即挑选病毒克隆（clone）株；③根据蚀斑的形态和大小等特征，作为研究病毒遗传和变异的指标；④作为滴定病毒的一种特殊手段。因为有些病毒只能形成蚀斑而不出现致细胞病变作用：⑤应用蚀斑抑制试验和蚀斑减数试验，测定血清或其他体液内中和抗体中和病毒的能力和干扰中和病毒的能力。

有单层法和悬浮法。

单层法

①将敏感细胞在培养瓶内培养成单层；②倒掉生长液，加入无血清维持液，37℃浸泡1小时后倾弃；③用无血清维持液将病毒作连续的10倍稀释，选择合适稀释度的病毒悬液接种在细胞单层上，接种量为培养液的1/10～1/20，每个稀释度至少接种2～3瓶；④37℃感作1小时，使病毒充分吸附于细胞；⑤加入融化并冷却至43～45℃的含有中性红的营养琼脂于培养瓶内无细胞的一面，再将培养瓶缓慢翻转，使营养琼脂覆盖在细胞面上，厚度约2毫米，平放30～60分钟，待琼脂凝固，置37℃避光培养，逐日观察、计数蚀斑。

悬浮法

①先将43～45℃的营养琼脂注入培养瓶内，使其形成2毫米厚的营养琼脂底层；②用无血清维持液将细胞稀释成适宜浓度，放入一系列试管内，每管0.8毫升，再加入以无血清维持液稀释的适当浓度（例如10^－3～10^－8）的病毒悬液0.2毫升，每个稀释度至少接种3管，充分振荡混合后置37℃感作30分钟，每10分钟摇振一次；③每管加入等量43～45℃营养琼脂，迅速混合后倒入培养瓶内的底层琼脂上，平放待自然凝固；④37℃培养，根据各种病毒可能出现蚀斑的时间（一般3～4天或更长一些时间），用0.01%中性红溶液染色，每瓶倾加4～5毫升（10毫升瓶内）37℃感作1小时，除去多余中性红，计数蚀斑。如果未出现，可将培养瓶继续避光培养，直至出现清晰的蚀斑。