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布鲁氏菌抗原

诊断布鲁氏菌病的生物制品。常用的有试管凝集试验抗原、补体结合试验抗原、乳汁环状试验抗原和虎红平板凝集试验抗原等。试管凝集试验抗原以抗原性良好的光滑型布鲁氏菌,接种于适宜培养基上培养,收集纯菌经灭活后,按不同浓度经国际标准阳性血清标化制成。效价用新制的抗原和标准抗原各稀释20倍,各0.5毫升分别与布鲁氏菌国际标准阳性血清(含1000国际单位/毫升)不同稀释度的各0.

诊断布鲁氏菌病的生物制品。常用的有试管凝集试验抗原、补体结合试验抗原、乳汁环状试验抗原和虎红平板凝集试验抗原等。

试管凝集试验抗原

以抗原性良好的光滑型布鲁氏菌,接种于适宜培养基上培养,收集纯菌经灭活后,按不同浓度经国际标准阳性血清标化制成。效价用新制的抗原和标准抗原各稀释20倍,各0.5毫升分别与布鲁氏菌国际标准阳性血清(含1000国际单位/毫升)不同稀释度的各0.5毫升混合,两者均须在血清1∶500稀释管(最终稀释度1∶1000)出现50%凝集者为合格。使用时用含0.5%石炭酸生理盐水稀释液,将抗原稀释20倍,被检血清稀释成为不同浓度,每管加入抗原0.5毫升,振荡混合均匀,放37℃反应22~24小时,当被检的牛、马、骆驼血清1∶100,猪、山羊、绵羊和狗血清1∶50出现50%凝集者为阳性。在2~15℃保存,有效期一年半。

补体结合试验抗原

是布鲁氏菌生理盐水悬浮液或菌体浸出液,与抗体结合后,其复合物能结合补体的抗原。制造时用生理盐水洗下布鲁氏菌培养物,加热杀菌,悬浮于生理盐水中制成。或将死菌悬浮液浸泡两个月,吸取上清液为抗原。不同稀释度抗原与标准布鲁氏菌病阳性血清的不同稀释度,按方阵式作补体结合试验滴定效价,抗原效价须大于1∶100。实际应用时,抗原的稀释度应比测定时效价高25%。抗原在2~15℃保存一年半有效。用于诊断猪、牛、羊布氏菌病时,血清1∶10稀释度出现50%抑制溶血现象者判为阳性。

乳汁环状试验抗原

有红色和蓝色两种。①红色抗原是用肉汤将光滑布鲁氏菌培养物洗下,加入适量四氮唑,作活体染色,发红后加杀菌剂灭菌,离心取沉淀的菌体悬浮于石炭酸生理盐水中,用布鲁氏菌病国际标准阳性血清标定抗原浓度,即与标准阳性血清作试管凝集试验时,凝集价为1∶1000的抗原稀释度为抗原最适浓度。按此浓度稀释即为使用抗原。②蓝色抗原是用生理盐水将培养物洗下,加热杀菌,加入苏木素及其媒染剂混合染色,离心洗去多余染料,将菌体悬浮于石炭酸生理盐水中,按上法标定抗原浓度,并稀释成使用抗原。制成的使用抗原,经与国际标准血清作凝集试验,凝集价在1∶1000为合格。试验时取受检鲜乳1毫升,盛于小试管中,加入0.03毫升染色抗原混匀,使抗原分布于乳柱中,置于37℃水浴中1小时,若乳柱恢复白色状态,乳皮层染成红色环或蓝色环,判为阳性。

虎红平板凝集试验抗原

将布鲁氏菌培养物洗下后,加热杀菌,加入适量虎红(四氯四碘荧光素)染色,离心除去过多染料,取出沉淀染色菌体,以1克菌体悬浮于4~6毫升缓冲盐水中,用国际标准布鲁氏菌病阳性血清标定其最适浓度。凡对100个国际标准凝集素单位发生50%凝集者,为最适浓度,按此浓度稀释制成的抗原,经与国际标准血清10倍稀释作平板凝集试验,呈现50%凝集为合格。试验时,滴一滴受检血清于玻片上,加入等量虎红抗原,混匀,在4分钟内出现50%凝集者判为阳性。

乳汁环状试验抗原供检验牛、羊乳汁,作环状反应试验用,其他三种抗原供检验血清用。虎红抗原作为初步检测,发现阳性者,再用试管凝集抗原作凝集试验判定结果。个别动物还需用补体结合试验判定结果。