在电解质的参与下，胶体状态的可溶性抗原（如蛋白质或多糖等）与相应抗体结合、凝聚并形成白色絮状沉淀的一种血清学试验。包括液相沉淀试验和在琼脂凝胶上进行的凝胶免疫扩散两大类，是对抗原、抗体定性定量检测的重要手段。

在清澈的液体中进行沉淀反应。

先将已知的抗血清加入内径3毫米的细玻璃管内，再沿管壁徐徐叠加等体积待检抗原溶液，成为分界清晰的两层，放置在37℃温箱内数分钟至半小时后，两液接触面出现白色环状沉淀物者为阳性反应。操作时须用澄清的抗血清和抗原溶液，如混浊应先离心。试验时一般不稀释抗体，而是将抗原作较大倍数的稀释。此法多用于抗原定性试验，如诊断炭疽病的阿斯科利（Ascoli）反应以及链球菌血清型的鉴定和沉淀素的效价测定等。

亦称最适比法。通常采用固定抗体稀释抗原，也可二者同时稀释进行方阵滴定，抗原抗体在小试管内按不同比例混合后，置37℃水浴，每隔一定时间观察一次，记录出现反应的时间和絮状物数量，出现反应最快和絮状物最多的一管，即其最适比例。该法常用于毒素、类毒素和抗毒素的定量测定，所测的单位称为絮状单位。

琼脂凝胶是一种网格样的半固体，网孔内充满水分，其孔径大小取决于琼脂浓度。常用的琼脂浓度为1%，其网格孔径约85纳米，这样的孔径允许可溶性抗原和小病毒及抗体分子在琼脂凝胶中自由扩散，形成梯度浓度，在抗原抗体比例适当处相互结合形成肉眼可见的沉淀线。由于每一种抗原成分在琼脂中的扩散系数不同，均可形成特定的沉淀线，并反映出一定的量的关系，故该试验已被广泛用于生物科学诸多研究领域的抗原鉴定、组成分析和定量。

该试验可在试管、平皿或玻片上进行。可区分为单向扩散和双向扩散；又可根据抗原抗体两种成分是一种扩散，还是两种同时扩散而分为单扩散和双扩散。因而有单向单扩散、单向双扩散、双向单扩散、双向双扩散四种（图1），前二者现已少用。

图1 琼脂扩散的四种基本类型

亦称辐射扩散。先将抗血清混匀在含有电解质的凝胶中，制成含有抗体的凝胶板，然后打孔，孔中加有一定量的被检可溶性抗原，置密闭湿盒内，在恒温下扩散。抗原在含抗血清的凝胶中扩散，形成梯度浓度，在抗原与抗体比例适当的部位，于孔的周围形成肉眼可见的沉淀环，沉淀环的直径或面积与加入的抗原量成正比，与抗体浓度成反比。因此可用已知浓度的抗原制成标准曲线，据以查出测定抗原的量，反之亦可。常用于蛋白抗原或抗血清中抗体含量的测定。用于鸡马立克氏病的诊断时，可将羽囊插入抗血清琼脂，出现白色环状沉淀者，判为阳性。

简称双扩散。在凝胶板上按一定图形打孔，最常用的是梅花形的7孔图形。然后按试验要求在孔中加入抗原和抗体，置于饱和湿度和适当温度下，经一定时间后，两者相向扩散，在两孔之间比例最合适的位置上形成沉淀线。如有两种抗原抗体就可形成两条沉淀线。检测抗原时，将抗血清置中央孔，已知抗原和待检抗原滴加于周边孔，当两种抗原完全相同时，两条沉淀线融合相连；如两种抗原完全不同时，则两条沉淀线交叉而过，如两种抗原之间有部分相同的抗原决定簇时，则两条沉淀线不完全融合并出现一个叉角刺突。反之可用以检测抗体，沉淀线与两侧孔完全融合者判为阳性，两侧沉淀线向内弯曲者判为弱阳性，不出现沉淀线者判为阴性（图2）。此法主要用于传染病的诊断和检疫、抗原成分鉴定和抗体效价的半定量。（韩福祥）

图2 双扩散用于抗体检测