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发光免疫测定

利用化学发光和生物发光原理建立起来的一类免疫检测技术。其中以化学发光免疫测定(chamilumineseent immunoassay,CIA)应用最广。其原理与放射免疫测定(RIA)相似,只是用化学发光标记物代替同位素标记物。当化学发光分子被氧化时

利用化学发光和生物发光原理建立起来的一类免疫检测技术。其中以化学发光免疫测定(chamilumineseent immunoassay,CIA)应用最广。其原理与放射免疫测定(RIA)相似,只是用化学发光标记物代替同位素标记物。当化学发光分子被氧化时,释放出大量光子可加以测量。最常用的标记物是鲁米诺(luminol)及其衍生物,它们在碱性条件下,通过微过氧化物酶(microperoxidase)催化,可释放出大量光子。CIA测定方法可分为两大类。

均相法

用化学发光物标记半抗原(如孕酮、雌三醇等),当标记结合物与抗体结合后,其发光强度显著增强。如存在相应配体(未标记半抗原),则可竞争与抗体结合,使发光强度减弱,呈一定量的关系。故可用以代替放射免疫,作超微量分析,其敏感性可达皮克(pg)数量级。

非均相法

根据分离方法又可分为两种。①液相法:与RIA十分相似。标记抗原、待检抗原与抗体竞争结合后,用抗抗体、聚乙二醇(PEG)等分离结合物,分别加入催化剂,即可在发光光度计上,检测发光强度。此法已用于孕酮、睾酮等的测定,其灵敏度和精密度已达到RIA水平。②固相法:与酶联免疫测定技术十分相似。通常在聚苯乙烯小管或小珠上进行,有竞争法、间接法、双抗体夹心法等。因反应物经洗涤后干扰物质大量清除,故本底明显降低,也可按液相法进行,然后加入结合二抗的聚丙烯酰胺微球作固相分离剂,其灵敏度可达5皮克。