以荧光素标记抗体作探针借以示踪抗原或抗原抗体复合物所在部位的一种血清学定位技术。带抗原的标本经荧光抗体染色后，在荧光显微镜的短波光（蓝紫光或紫外光）激发下，使结合在抗原上的荧光素发出明亮荧光，易于观察。该项技术既有免疫学的特异性和敏感性，又有借助显微镜观察的直观性与精确性，多用于病毒性传染病的诊断。

在荧光抗体技术中常用的荧光素是人工合成的荧光性染料，有异硫氰酸荧光黄（fluorescein isothiocya-nate，FITC）、四乙基罗丹明（rhodamine B-200，RB 200）和四甲基异硫氰酸荧光黄（TMRITC）等，其中以FITC应用最广。荧光抗体染色方法主要有3种（图）。①直接法：标本片固定后，直接滴加荧光素标记的抗体，置湿盒内，37℃30分钟，再放置于大量pH7.0～7.2的磷酸盐缓冲液（PBS）中漂洗15分钟，干燥，加甘油缓冲液封载，即可在荧光显微镜下观察。应用此法时，一种标记抗体只限于诊断一种疾病，如猪瘟荧光抗体只能用于猪瘟诊断。②间接法：标本片先用未标记的抗体处理，漂洗后再加用荧光素标记的抗抗体，漂洗、干燥、封载，即可用于镜检。该法仅需标记一种动物的抗抗体，即可用于该动物的多种疫病的诊断。③抗补体法：利用补体能与抗原抗体复合物相结合的原理，用荧光色素标记抗补体抗体。先将未标记的抗体和补体结合到抗原上，漂洗后再加上用荧光色素标记的抗补体抗体染色。本法因反应多次扩大，荧光亮度较强，且只需标记一种抗补体抗体，即可用于多种抗原抗体系统的检查；但因非特异荧光较强，故少用。

荧光抗体染色方法