化学反应，生成不溶性偶氮副品红萘酚（红色沉淀），沉积于T细胞浆内酯酶所在部位，经甲基绿复染，反应颗粒变暗呈棕红或黑红色。将干燥固定后的血片或淋巴细胞悬液涂片，浸入α-醋酸萘酯和偶氮副品红的染色液中，37℃1小时，用1%甲基绿复染，镜检，凡胞浆内有棕红色颗粒者为阳性细胞（T细胞），无颗粒者为阴性细胞（B细胞），即可测出ANAE阳性细胞百分率。
通过ANAE活性检测借以鉴别成熟T细胞的方法。简称酯酶染色法。T细胞内含有多种酶类，如α-醋酸萘酯酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、β-葡萄糖苷酸酶及核苷酸酶等，不同淋巴细胞亚群所含酶类亦异。成熟T细胞具有ANAE活性，而B细胞无此特性，应用该项检测方法，即可鉴别T细胞，测定T细胞的相对含量。
T细胞浆内的ANAE在弱酸性条件下，能使底物α-醋酸萘酯水解成醋酸和α萘酚，后者与六偶氮副品红偶联，通过化学反应，生成不溶性偶氮副品红萘酚（红色沉淀），沉积于T细胞浆内酯酶所在部位，经甲基绿复染，反应颗粒变暗呈棕红或黑红色。
将干燥固定后的血片或淋巴细胞悬液涂片，浸入α-醋酸萘酯和偶氮副品红的染色液中，37℃1小时，用1%甲基绿复染，镜检，凡胞浆内有棕红色颗粒者为阳性细胞（T细胞），无颗粒者为阴性细胞（B细胞），即可测出ANAE阳性细胞百分率。但ANAE活性也并非T细胞所独有，单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及嗜碱性粒细胞等也可表现此酶活性，但各种细胞的染色类型各具特征，可以从形态上加以区别。
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