制备细菌类生物制品的主要工艺。依据被培养细菌的要求与培养目的,选择适宜的培养基和适当的培养方法。深层通气培养一种装有大培养罐的生物发酵方法,20世纪50年代用于生产生物制品的细菌培养。较好的培养罐装置,以不锈钢制成罐体,安装有供监测用可自动记录并控温、消泡、调pH、通气量等仪表。
制备细菌类生物制品的主要工艺。依据被培养细菌的要求与培养目的,选择适宜的培养基和适当的培养方法。
一种装有大培养罐的生物发酵方法,20世纪50年代用于生产生物制品的细菌培养。较好的培养罐装置,以不锈钢制成罐体,安装有供监测用可自动记录并控温、消泡、调pH、通气量等仪表。通气培养过程可通过测定排出气体中氧和二氧化碳量的分析,进行自动调节,以其最佳培养条件,提高活菌数或总菌量或产毒单位。一般性好氧菌深层通气培养,每毫升活菌数可达1×109~1×1011或更高。对一般性厌氧菌用大罐深层静置培养,也可获得产量高与质量好的制品。深层培养的技术关键:①通入的气体必须经高效滤器除菌彻底;②适当搅拌分散通入的气体,以增加培养液中的溶氧量;③接种种子后需静置培养1~2小时,再逐渐增大通气量;④加消泡剂要适量并在培养基消毒后加入;⑤培养全过程应在密闭条件下进行。
大量培养细菌或毒素的装置,以其在培养过程能不断供给新的营养,同时移出培养物中代谢产物与细菌,保持并延长细菌繁殖过程的对数生长期。连续培养装置有多种样式,都是由灭菌培养基贮存罐、培养罐和菌液收集罐三部分组成。培养方式有:①在培养罐中装入一定量培养基后,接种种子液,培养过程中不断地滴入新培养基,当培养罐菌液超过一定水平时,逐渐溢出并流入菌液收集罐,控制培养基滴入速度和容量,可控制培养菌液的流出量,保持菌液的浓度,提高制品质量。②连续翻番培养。用1500升培养罐通气培养,当接种种子培养一定时间后,放出半量培养物,然后输入与放出量相等的培养基,使细菌保持对数生长。在生产中证明以每小时翻番一次,如连续50代培养的多杀巴氏杆菌,没有变异,制出的灭活苗效力良好。
细菌培养液与培养基之间,隔有一层透析膜的培养方法。由于透析膜只能透过小分子量的营养成分,不能透过大分子的细菌或毒素,使培养基中高浓度的营养物,通过透析膜不断扩散到培养液中,使细菌不断获得必需的生长因子,故能获得高浓度纯菌或毒素。斯坦氏(M.Sterne,1946)用于培养肉毒梭菌C和D型,每毫升毒素分别达到2×106和1×108,制成的类毒素效价,比静置培养制成的类毒素,效价高500~1000倍。适于透析培养的透析器有封闭式和循环式两种。封闭式(又称批式)是在同一容器内,用透析袋或透析膜将培养基与培养菌液分开;循环式是将培养基与培养菌液,分为两个独立系统,各用管道与透析器连接。透析器的培养基室容量比培养室容量大10倍。装置透析器必需严密无渗漏,透析膜需经试验选择,以易于消毒,不易破损,能阻挡微生物与大分子物质渗透,并对溶质的扩散有较高效率,不被细菌产生酶所分解等为原则。
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