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胚胎保存

使胚胎贮存于体外而不丧失其活力的技术。通过胚胎保存可以达到两个目的:①使胚胎移植不受时间和空间的限制。②建立动物胚胎库,长期保存珍贵品种和濒于灭绝的动物资源。与精子相比,胚胎是体积较大、多细胞结构的细胞团,故在保存过程中易受损伤,保存技术要求较高。主要有以下两种胚胎保存方式:①异种动物体内保存。

使胚胎贮存于体外而不丧失其活力的技术。通过胚胎保存可以达到两个目的:①使胚胎移植不受时间和空间的限制。②建立动物胚胎库,长期保存珍贵品种和濒于灭绝的动物资源。与精子相比,胚胎是体积较大、多细胞结构的细胞团,故在保存过程中易受损伤,保存技术要求较高。

主要有以下两种胚胎保存方式:①异种动物体内保存。把一种动物胚胎移入另一种动物输卵管内经短期保存后,再取出移植到同种动物的受体母畜子宫内,继续发育至产仔。兔子体重小,输卵管又适合于它种动物胚胎发育,所以是胚胎体内保存的理想动物。②体外保存。可分为低温短期保存和超低温长期保存两种。

低温保存

胚胎在0~10℃保存时,细胞停止分裂,虽代谢显著降低,但细胞某些成分,特别是酶仍处于不稳定状态,故胚胎保存时间受到限制。低温保存的优点是操作简便,不需复杂的仪器设备。胚胎低温保存后的成活率受保存温度、保存液、保存时间、保存方法、胚胎发育阶段和质量等因素的影响。目前大多数动物胚胎的低温保存均采用杜氏磷酸盐缓冲液作为保存液。胚胎在0℃保存时,保存48小时以内不会降低活力。低温保存方法是:胚胎用添加灭活血清和适量抗生素的保存液洗二遍,装入0.25毫升塑料细管中,两端封口后,直接插入碎冰浴内冷冻到0℃,并保存在冰箱内。移植前放在室温或37℃水浴中直接升温。

超低温冷冻保存

胚胎在液氮中(-196℃)保存,可达到长期保存的目的。从理论上讲,只要不脱离液氮环境,胚胎可无限期保存。已有牛、绵羊、山羊、马、猪、大鼠、小鼠、仓鼠、兔、羚羊、猴、狒狒等哺乳动物胚胎,经超低温冷冻保存成功。为防止胚胎在冷冻过程中的物理损伤(细胞内结冰)和化学损伤(溶液效应),需添加抗冻剂和慢速降温,以降低低温对细胞产生的损害。

超低温冷冻保存方法:胚胎在冷冻前需分步添加抗冻剂,装入塑料细管内,按照一定的降温操作程序,进行降温、诱发结晶、慢速冷冻,并在液氮中长期保存。冷冻胚胎在移植前,于30~37℃水浴中解冻后,用含一定浓度的蔗糖或甘油的保存液分步脱除抗冻剂,然后用于移植。冷冻胚胎的移植成功率一般比新鲜胚胎低10%左右。