以溶血系统为指示剂，在补体参与下测定被检系统中是否存在相应的抗原、抗体的血清学试验。补体不能单独与抗原或抗体结合，而只能与抗原抗体复合物结合，如复合物中的抗原是细菌，则与补体结合后可使之溶解而称为溶菌反应；如抗原是红细胞，则可使之溶解而称为溶血反应。后者反应十分明显，容易观察，因此，常用作该项试验的指示剂，以此反映可溶性抗原与抗体是否相对应、补体是否已被结合等，如补体已被结合，则不出现溶血反应。

进行该项试验涉及两个系统5种成分，包括被检系统的抗原、抗血清，溶血系统的溶血素和绵羊细胞以及补体。试验分两个阶段，先将抗原及加热灭活的被检血清和补体（豚鼠血清）作用一定时间，待反应完成后。再加入绵羊红细胞和溶血素。如发生溶血，说明抗原抗体不相对应，有游离补体存在，结果判为阴性；如抗原抗体相对应，补体被结合，不发生溶血，则判为阳性（图）。试验时需设阳性血清和阴性血清对照、抗原抗补体和阴性抗原（正常组织）抗补体对照、补体对照和稀释液对照等。试验过程中应注意避免因存在抗补体物质而出现假阳性。

补体结合试验原理

此试验的各种成分，在正式试验之前必须严格定量，50%补体溶血活性的测定十分重要。溶血程度与补体量成正比，当溶血在30～70%范围内，补体有小量变化即可引起溶血程度的改变。

禽类抗体不能结合豚鼠血清（补体），因而设计了一种间接补体结合试验方法，此法也是按补体结合试验方法进行，只是在加入指示系统之前，需加入抗该抗原的兔抗体（血清），兔抗体可以和豚鼠补体结合。先将禽抗体和抗原反应，当加入兔抗体时，由于没有多余的抗原与其结合，因而补体仍然游离，这种游离可由后来加入指示系统发生溶血反应而显示出来。因此间接补体结合试验与补体结合试验的结果恰恰相反，当发生溶血时，表示被检禽血清中有抗体存在，反应阳性；若不溶血，表示禽血清中没有抗体存在，判为阴性。本法亦称补体结合抑制试验。

补体结合试验操作方法很多。根据稀释的材料不同，有稀释抗原法、稀释抗体法和稀释补体法；根据反应量不同，有全量法、半量法、半微量法和微量法等。目前已发展到微量自动化阶段。

影响该项试验的因素较多，操作比较复杂；同时不能用于检测含有IgE和IgA的抗体，因这些免疫球蛋白不能结合补体；亦不能用于检查某些毒素的抗原，因毒素能溶解指示系统的红细胞，还不适用于超敏感状态或细胞免疫反应的诊断。抗原不纯，或有类脂质存在以及含有非特异性物质和抗补体因子等都能影响该试验的效果。猪血清灭活后，补体结合活性显著下降，也不适于作该项试验。

此试验可用于鼻疽、牛传染性胸膜肺炎、布鲁氏菌病、副结核病、口蹄疫、流行性感冒、牛出血性败血病等的检疫。