利用放射性同位素示踪技术与抗原抗体反应结合起来的一种超微量测定技术。同位素具有高度的灵敏性，而抗原抗体又有高度的特异性，二者结合起来使该技术具有特异性强和灵敏度高的优点。如采用高度亲和力的抗体和高比放射性的标记抗原时，其灵敏度可达纳克，甚至皮克数量级。该技术为研究许多含量甚微而又很重要的生物活性物质在生物体内代谢、分布和作用机理等提供了重要的超微定量手段。已用于动物生理或病理活动功能、血液中生物活性物质的检测，各种激素和酶在不同时期或阶段含量的变化、动物体液中药物浓度的测定以及各类疾病的诊治等。

该技术有固相法及液相法两种，其原理是标记抗原（^*Ag）和未标记抗原（Ag）对特异性抗体（Ab）的竞争性抑制反应。

放射免疫测定

用放射性同位素标记抗原（^*Ag）与一定量的抗体（Ab）结合形成可逆的^*Ag-Ab复合物。此结合物中的结合抗原称为B（bound^*Ag），未与Ab结合的游离抗原称为F（free^*Ag）。在此系统中，如加入待检的未标记Ag，则^*Ag和Ag竞争此定量抗体，最后达到平衡状态，加入的Ag越多，则^*Ag与Ab结合就越少。在上述复合物中加入适当的分离剂使B与F分开，然后分别测其放射性，即可计算出B/F值和结合百分率（B%）。用已知浓度的标准物（Ag）和一定量的^*Ag、Ab反应，测出不同浓度的Ag的B/F值或B%（图）。以标准物的浓度为横坐标，B/F或B%为纵坐标，即可绘制出竞争性抑制反应的标准曲线，并从标准曲线中查出待检样品Ag的浓度。分离B、F的方法很多，可根据实验要求选用活性炭、聚乙二醇、抗抗体及用微孔滤膜抽滤等方法，亦可将抗抗体吸附于载体上做成固相分离剂。

竞争性放射免疫分析示意

该项技术必须具备的基本条件是：①必须要有高纯度、稳定，保有一定免疫活性、不易失活的标准抗原。②要有特异性好、亲和力强、滴度高的抗体；③所用的同位素比放射性要高，对抗原无损害或损害较小，半衰期较长，标记过程简便。常用的有：¹²⁵I、¹³¹I、³H、¹⁴C等，前两者可用脉冲计数器测定，后者须用液体闪烁仪测定。④B与F的分离要快速安全，非特异性结合率低，操作简便；试剂来源容易、价廉、不受其他试剂干扰，重复性好。⑤测定放射性强度的仪器，要求本底低，计数率高，稳定性好。⑥测定样品需适当提取，除去抑制物质和干扰因子。⑦所用的试剂盒要符合标准，并经常检查核对。每批样品检测时，需同时应用标准品作标准曲线。

将抗体或抗原连接在聚苯乙烯小管或小珠上做成固相载体，反应在固相载体上进行，操作简便、快速，适于制成标准试剂盒推广应用。方法很多，主要有：①单层竞争法。将抗体连接于载体上，加入^*Ag和待检Ag，二者竞争与抗体结合。如^*Ag的量不变，则加入Ag的量越多，B/F值或B%越少。根据这种函数关系，就可在事先制备的标准曲线上，得出待检Ag的量。此法主要用于测定小分子半抗原。②多层非竞争法。先制备固相抗体，用时先加入待检A作用后洗去未结合的Ag，再加入标记的抗体（^*Ab，使成Ab-Ag—^*Ab复合物，洗涤后测定其放射性，即可测出待检Ag浓度。此法主要用于大分子抗原的测定。