获得用以生产单克隆抗体细胞系的技术，简称杂交瘤技术。将免疫淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，经过培养、筛选和克隆化，获得既能分泌特定单克隆抗体，又能无限制增殖的杂交瘤细胞系。该技术于1975年由凯勒（G.Kohler）和米尔斯坦（C.Milstein）首创并获1984年度生理学和医学诺贝尔奖。

骨髓瘤细胞来自人和动物的骨髓瘤细胞系，经过长期体外培养和药物筛选，已失去合成次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶（TK）的能力，亦不能合成或分泌Ig。将此骨髓瘤细胞和免疫后能产生特定抗体的淋巴细胞（通常用脾脏淋巴细胞）在聚乙二醇（PEG）等融合剂的作用下使其杂交融合后，在含有次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷（T）的选择培养基（HAT）中培养。在HAT培养基中，骨髓瘤细胞因无旁路途径合成DNA的酶（HGPRT或TK），在有DNA经典途径合成阻断剂（A）时，不能生长。同时，淋巴细胞无法在体外长期连续生存、继代，而骨髓瘤细胞则可适应体外无限增殖。杂交瘤细胞因具有这两种细胞的基因，恰可互为补充，故可在该选择培养基上生存、繁殖。杂交瘤细胞成活后，其中一部分能分泌针对预定抗原的抗体，经筛选和克隆化，从而建立能分泌针对特定抗原的同质性抗体的单克隆杂交瘤细胞系。

杂交瘤技术自诞生以来，其具体程序已有所改进，但基本步骤一致。

免疫淋巴细胞制备

用尽可能纯化的抗原免疫8～12周龄BALB/C小鼠，免疫剂量、途径和程序依具体情况而定。末次免疫后2～4天取小鼠脾脏制备免疫淋巴细胞。

骨髓瘤细胞的制备

一般选用BALB/C小鼠来源的骨髓瘤细胞系NSI、SP2/0或X63-Ag8·653。保存于液氮中，用前复苏。在含10%胎牛血清的DMEM或RPMI 1640培养基中培养，并维持其对数生长。

以1∶2～10的比例将骨髓瘤细胞和淋巴细胞混合，以50%PEG（10⁸淋巴细胞/毫升）于38℃作用1分钟，用HAT培养基稀释后分装96孔或24孔细胞培养板，置37℃CO₂恒温箱培养。

杂交瘤细胞的筛选

吸取培养10～15天细胞的上清，以既定方法检测抗体。其具体方法依所用抗原种类、抗体的主要用途和实验室条件等因素而定，以准确、快速和简便为原则。

杂交瘤细咆的克隆化

将抗体检测阳性培养孔中的杂交瘤细胞扩大培养，用软琼脂法或有限稀释法进行克隆化。检测单克隆细胞孔上清中的抗体，筛选出阳性克隆并进行克隆增殖。为了确保细胞的单克隆性质，通常需进行2～3次克隆化，同时对所分泌的单抗需进行系统的免疫生物学和理化特性鉴定。单克隆杂交瘤细胞系建立后可用常规的冻存方法在液氮中保存。

单克隆抗体的生产

可采用杂交瘤细胞体外培养法和体内生长法。在悬浮培养条件下，杂交瘤细胞上清中单抗的浓度可达5～50微克/毫升；当有中空纤维等载体时，因杂交瘤细胞密度大大提高，上清单抗浓度可达0.5～5毫克/毫升。体内法一般用腹腔注射降植烷或液体石蜡激化的BALB/C小鼠，每只腹腔注射10⁶～10⁷杂交瘤细胞，10天后收集腹水和血清，单抗浓度可达5～15毫克/毫升。

进展

1975年以后，杂交瘤技术的研究内容得到不断充实。最早的杂交瘤都是小鼠—小鼠杂交瘤，后来出现了大鼠—大鼠杂交瘤。人—人杂交瘤技术的建立和完善，为人用单抗治疗药物的生产创造了前提。此外，T细胞杂交瘤、种间杂交瘤和四交瘤（两个杂交瘤的杂交）的出现都大大丰富了该技术的研究内容。在研究方法方面，除不断改进融合技术、提高融合率和特异抗体的阳性率外，还实现了与DNA重组技术的结合。如将重链基因的可变区片段与轻链基因可变区拼接起来，其表达产物具有原来双链分子的特定构型，从而保持原有的结合位点的特异性。这种称为第二代抗体的单链Ig分子，其体积仅为正常Ig分子的1/6，具有生产成本低、体积小和稳定性大的优点。又如将人Ig恒定区基因与小鼠Ig的可变区基因拼接起来，生产杂交抗体，可以克服小鼠单抗用作人治疗药物而产生的排异问题。