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胚胎性别鉴定

移植前鉴定早期胚胎性别的技术。胚胎经性别鉴定后,根据生产上的需要,移植所需性别的胚胎,人为地改变性比例,达到性别控制的目的,以加快优良品种的繁育速度,有效地加速畜牧业的发展。胚胎性别鉴定技术大致可分为细胞学、免疫学、分子生物学三种方法。细胞学方法核型分析或染色体分析。通过查明组成胚胎性染色体的类型进行性别鉴定。如果是XX型,胚胎为雌性;若为XY型,胚胎则为雄性。

移植前鉴定早期胚胎性别的技术。胚胎经性别鉴定后,根据生产上的需要,移植所需性别的胚胎,人为地改变性比例,达到性别控制的目的,以加快优良品种的繁育速度,有效地加速畜牧业的发展。

胚胎性别鉴定技术大致可分为细胞学、免疫学、分子生物学三种方法。

细胞学方法

核型分析或染色体分析。通过查明组成胚胎性染色体的类型进行性别鉴定。如果是XX型,胚胎为雌性;若为XY型,胚胎则为雄性。从家畜胚胎上采集少量细胞,经乙酰甲基秋水仙碱阻断有丝分裂,再经过固定和染色后,即可进行核型分析。虽此法鉴定准确率可接近100%,而且在70年代获得了用此法鉴定性别后移植成功的羔羊和犊牛,但胚胎可鉴定率约为30%左右,技术操作较复杂,鉴定周期长(约5~6小时),实用价值不大。目前仅用于验证其他胚胎鉴定方法的准确性。

免疫学方法

主要是H-Y抗原法。在胚胎发育早期,胚胎细胞表面具有雄性特异的组织相容性膜抗原(即H-Y抗原)。通过用小鼠免疫制作的H-Y抗体与胚胎反应,然后用带有异硫氰酸荧光素(FITC)的第二抗体标记的间接免疫荧光法,进行胚胎性别鉴定。经处理的胚胎,在荧光显微镜下观察。胚胎细胞上出现光斑,为H-Y阳性,胚胎为雄性。胚胎背景黑暗、无荧光斑或均匀荧光为背景者为H-Y阴性,胚胎为雌性。家畜胚胎用此法进行性别鉴定的准确率为80%左右。由于H-Y为弱抗原,易与其他细胞成分发生非特异性结合或交叉反应,在进行荧光判断时,易出现假阳性,鉴定的准确率受到一定的影响。

分子生物学法

扩增胚胎细胞Y染色体上特有的DNA序列,若有Y染色体DNA存在,胚胎鉴定为雄性。20世纪80年代末期发展起来的分子生物学鉴定胚胎的方法主要有两种:①核酸探针技术。用Y染色体上特异DNA片段标记成探针,与胚胎样品中的同原序列杂交,然后进行检测。有杂交斑点显示者,证明胚胎有Y染色体存在,鉴定为雄性;无杂交斑点显示,胚胎为雌性。此法具有特异、准确的优点。但检测时间约需30小时左右,不易在生产上推广应用。②聚合酶链反应(PCR)技术。以雄性特异性片段DNA序列两端合成一对引物,以胚胎DNA序列为膜板,在TaqDNA聚合酶的存在下,进行DNA合成,扩增靶序列至106~1010倍以上。扩增后产物经电泳,观察是否出现特异Y染色体DNA扩增带,出现者为雄性胚胎,否则为雌性胚胎。此法具有灵敏(可检测1~5个细胞)、准确(准确率达到95%以上)、快速(约3~5小时)、特异性强、操作简便等优点。若制成检测试剂盒,更便于在基层生产现场推广应用。