在同一试验中，设两个试验因素分几种水平，进行试验对比的方法。双因子试验与单因子试验相比，其优点是：①在一个规模不太大的试验中，可以比较经济地获得各因素的平均效果；②既可检验两个因素各水平间的差异，又可检验两因素间的相互作用；③提高各个因子在试验上的精确性。

例如，饲料能量分高低两个水平（用A₁、A₂表示），饲料蛋白质含量也分高低两个水平（B₁、B₂表示），组成四种饲料，每种饲料喂7头仔猪，试验结果见表1。

首先，不考虑饲料内容，把四种饲料分别喂给各组仔猪，按单因子试验处理，求误差均方，然后，以每组7头之和作出二元表，进行双因子试验法的解析。其步骤分为两个阶段。

第一阶段 ①求CT（由总和与总数计算）

CT＝733.6²/28＝19220.32

②求总平方和，S_ABR（由各变数计算）

S_ABR＝(34.5²……＋13.5²)－CT＝1907.82

③求饲料间平方和，S_AB（由竖行和计算）

S_AB＝(227.6²…＋137.4²)÷7－CT＝911.89

表1 仔猪的增重

④求重复误差即个体差平方和

S_R(AB)＝S_ABR－S_AB＝995.93

⑤计算自由度

f_ABR＝abr－1＝27

f_AB＝ab－1＝3

f_R(AB)＝ab(r－1)＝24

式中，a是A因子的水平数，b是B因子的水平数，r是重复数，ab是饲料种类数。

以上步骤与单因子试验例举不同之处是，饲料编号不是用A₁、A₂……，而是用A与B的组合来表示。饲料的水平数也是用A的水平数a和B的水平数b组合来表示。这都是为第二阶段作准备的。

第二阶段 按双因子试验法计算。第二阶段要研究饲料能量和蛋白质含量的效应，为此，首先作辅助表整理数据。

①作辅助表。辅助表就是把表1的四个竖行和重新排列。这个辅助表中的数据是7个测定值之和。把K＝7写在辅助表的左上栏，以提示每个数据都是7个测定值之和。

表2 仔猪增重辅助表

②求饲料能量之间和平方和，S_A（由辅助表横行计算）

S_A＝(445.9²＋287.7²)÷2×7－CT＝893.83

③求饲料蛋白质间的平方和S_B（由辅助表竖行计算）

S_B＝(377.9²＋355.7²)÷2×7－CT＝17.60

④求交互作用的平方和S_A×B

S_A×B＝S_AB－S_A－S_B＝0.46

⑤计算自由度

f_A＝a－1＝1

f_B＝b－1＝1

f_A×B＝(a－1)(b－1)＝1

⑥ 列方差分析表（表3）。

表3 表1资料的方差分析表

⑦ F检验。由表3的上半部分各变因均方与重复间误差均方之比所得的各项F值，与F值（1.24）与极显著水平（P＜0.01）的7.82相比较，能量效应（F＝21.5），差异极显著。可以看出，表3所示上半部分是双因子试验法的方差分析，下半部分则与单因子试验的方差分析相同。

进行双因子试验时，须注意：①除双因子外在其他条件应一致；②取样应随机化；③每个因子处理级别的数目，都应该有适当限制，不宜过多。